Laktoperoksidaz enziminin bazı kimyasallarla inhibisyon etkisinin incelenmesi

Abstract

Laktoperoksidaz (E.C. 1.11.1.7); moleküler ağırlığı yaklaşık 78 kDa olup, hem grubu ve % 8-10 karbohidrat içeren 612 aminoasit zincirinden ibaret, tek bir polipeptid zincirinden oluşan bir enzimdir. Bu enzim, yenidoğanların sindirim sisteminden salgılanan patojen mikroorganizmalara karşı duran, tükürükte, gözyaşında ve sütte bulunan bir oksidoredüktazdır. Bu çalışmada sığır laktoperoksidaz (LPO) enzimini Sepharose 4B-etilendiamin-4-izotiyosiyonat benzen sulfonamid jeli saflaştırıldı. Enzimin saflık kontrolü SDS-PAGE ile kontrol edilmiştir. Enzimin saflaştırma derecesi 9241,44 verimi % 0,74 olarak bulunmuştur. Çalışmamızda endüstride, ziraatte ve eczacılıkta sıklıkla kullanılan kimyasalların enzim üzerine in vitro etkisi incelenmiştir. Bu amaçla çalışılan kimyasalların IC50 değerleri, Ki değerleri ve inhibisyon tipleri belirlenmiştir. Kimyasallar içinde katekol (benzkatekin) 5,36 μM ile en fazla inhibisyon etkisi göstermiştir. Allopurinol, guanidin, adenin, klorogenik asit, 4-aminofenil laktik asit ve lineoik asitin enzim üzerine etkisi gözlenmemiştir. Kimyasal maddeler içinde nikotinin Kİ değeri 4,22x10-4 M olarak bulunmuş, inhibisyon tipi olarak grafikten nonkompetitif inhibisyon olarak belirlenmiştir.

Lactoperoxidase (E.C. 1.11.1.7); The molecular weight is about 78 kDa, and is an enzyme consisting of a single polypeptide chain consisting of 612 amino acid chains containing both the group and 8-10% carbohydrate. This enzyme is an oxidoreductase found in tears and milk in the saliva, which stands against pathogenic microorganisms released from the digestive system of newborns. In this study, bovine milk lactoperoxidase (LPO) enzyme was achieved to be purified by a affinity chromatography gel, prepared by using CNBr-activated Sepharose-4B as a matrix, ethylene amine as a spacer-arm and inhibitors, 4- isothiocyonate benzene sulfonamide as the ligand. The purity of the enzyme has been checked by SDS-PAGE. The purification value for lactoperoxidase has been found as 9241.44 folds with 0.74 % yield. In our study, the in vitro effects of chemicals, which are frequently used in industry, agriculture and pharmacy, on the enzyme were investigated. For this purpose, IC50 values, Ki values and types of inhibition were determined. Catechol showed the most inhibition with 5.36 μM IC50 value in studied. Allopurinol, guanidine, adenine, chlorogenic acid, 4-aminophenyl lactic acid and lineoic acid were not effective on the enzyme. Type of inhibition due to the presence of nicotine in chemical substances, noncompetitive type from the graph with 4.22x10-4 M Kİ value.