Pektinaz enziminin hidrofobik etkileşim kromatografisi ile saflaştırılması

Abstract

Pektinazlar, bitkisel hücrelerde bulunan ve bitki dokularının bütünlüğünün korunmasında sorumlu olan pektinlerin hidrolizini katalizleyen heterojen bir enzim ailesidir. Pektinazlar, meyve sularının berraklaşıtırlması, yağ ekstraksiyonu iyileştirilmesi ve tekstil endüstrisi gibi birçok proseste sıklıkla kullanılmaktadır. Pektinazlar, Bacillus sp, Aspergillus indicus, Aspergillus iluvus, Aspergillus niveus, Pencilium sp., Penicilium chrysogenum, Aspergillus sojae, Byssochlamys fulva, Neurosporacrssa, Fusairum Oxysporum, Bacillus subtilis gibi birçok mikroorganizmadan saflaştırılmıştır. Bu çalışmada ise Aspergillus niger'den pektin liyaz enzimi saflaştırılmıştır. Saflaştırma işlemi ilk olarak amonyum sülfat çöktürmesi kullanılarak daha sonra ise hidrofobik etkileşim kromatografisi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi kullanılarak 6,05 kat, hidrofobik etkileşim kromatografisi kullanılarak ise 11,75 kat saflaştırma elde edilmiştir. Enzimim optimum pektin miktarının belirlenmesi için 0,9, 1,2, 1,5,1,9 gram pektin içeriklerine sahip farklı sıvı besiyerleri hazırlanmış ve bu inceleme sonucundan optimum pektin miktarının 1.2 gram pektin'de olduğu tespit edilmiştir. Optimum pektin miktarı belirlendikten sonra her 24 saat'te bir aktivite tayinleri yapıldı ve 72 saat süre sonunda maksimum aktivite gözlemlendi.

Pectinases are a heterogeneous family of enzymes that catalyze the hydrolysis of pectins which are found in plant cells and responsible for maintaining the integrity of plant tissues. Pectinases are frequently used in many processes such as clarifying fruit juices, improving oil extraction and textile industry. Pectinases are purified from many microbial sources such as Bacillus sp, Aspergillus indicus, Aspergillus iluvus, Aspergillus niveus, Pencilium sp., Penicilium chrysogenum, Aspergillus sojae, Byssochlamys fulva, Neurosporacrssa, Fusairum Oxysporum, Bacillus subtilis. In this study, pectin lyase enzyme was purified from Aspergillus niger. The purification process was first carried out by ammonium sulfate precipitation and then following by hydrophobic intertaction chromatography. 6,05-fold purification was obtained using ammonium sulfate precipitation and 11,75-fold purification using hydrophobic interaction chromatography. In order to determine the enzyme optimum pectin amount, different liquid media with pectin contents of 0,9, 1,2, 1,5, 1,9 grams were prepared and it was determined that the optimum pectin amount was in 1,2 gram from this examination. After determining the optimum amount of pectin, activity was determined every 24 hours and maximum activity was observed at the end of 72 hours.