IL-6’nın ADAMTS-8 gen ifadesi üzerine etkisinin belirlenmesi

Abstract

Kolorektal kanser dünya çapında en sık görülen kanserlerden biridir. ADAMTS-8 önemli bir anjiyoinhibitör gendir. IL-6 sitokinin kolorektal kanser ile ilişkili olduğunu gösteren çalışmalar mevcuttur. Bu tezin amacı, IL-6 sitokinin ADAMTS-8 gen ekspresyonu üzerindeki etkisini belirlemektir. MTT deneyi, 10 ng/mL, 20 ng/mL ve 40 ng/mL'lik farklı konsantrasyonlarda IL-6'nın HCT-116 proliferasyonu üzerindeki etkisini incelemek için kurulmuĢtur. IL-6 sitokininin HCT-116 hücre proliferasyonu üzerinde istatistiki olarak önemli bir fark oluşturmadığı belirlenmiştir. IL-6'nın 20 ng/mL konsantrasyonunda ADAMTS-8 gen ekspresyonu üzerindeki etkisi, western blot ve gerçek zamanlı PCR teknikleri kullanılarak protein ve mRNA düzeyinde belirlenmiştir. IL-6 ADAMTS-8 mRNA seviyesinde 1, 3 ve 24. saatlerde istatistiksel olarak anlamlı olarak artış gösterdiği belirlenmiştir. IL-6 sitokini ADAMTS-8 protein seviyesinde artan bir etki oluşturmaktadır. IL-6‟nın ADAMTS-8 gen ifadesi üzerinde gösterdiği bu etkinin hangi yolaktan gösterdiği ile ilgili yolak inhibisyon çalışmaları gerçekleştirilmiştir. IL-6 farklı yolak inhibitörler ile uygulandığında MEK inhibitörü ADAMTS-8 mRNA seviyesinin 0.5 kat azaldığı sonucuna varılmıştır. PI3K inhibitörü olarak Worthmannin inhibitörü uygulandığında 2-7 kat, p38 MAP kinaz inhibitörü olarak PD169 inhibitörü uygulandığında, 2-10 kat, JNK inhibitörü olarak SP600125 inhibitörü uygulandığında 2-7 kat artış, NFKB inhibitörü uygulandığında 20-30 kat artışı ADAMTS-8 geninin mRNA düzeyinde belirlenmiştir.

Colorectal cancer is one of the most common cancers worldwide. ADAMTS-8 is an important angioinhibitory gene. There are studies showing that IL-6 cytokine is associated with colorectal cancer. The aim of this thesis is to determine the effect of IL-6 cytokine on ADAMTS-8 gene expression. The MTT assay was set up to examine the effect of IL-6 at ifferent concentrations of 10ng/mL, 20 ng/mL and 40 ng/mL on the proliferation of HCT 116. It was determined that IL-6 cytokine did not make a statistically significant difference on HCT-116 cell proliferation. The effect of IL-6 on ADAMTS-8 gene expression at 20 ng/mL concentration was determined at the protein and mRNA level using western blot and real-time PCR techniques. It was determined that IL-6 ADAMTS-8 mRNA level increased statistically at 1, 3 and 24 hours. The IL-6 cytokine has an increased effect on the ADAMTS-8 protein level. Pathway inhibition studies have been carried out to determine from which pathway IL-6 exerts this effect on ADAMTS-8 gene expression. It was concluded that MEK inhibitör ADAMTS-8 mRNA level decreased 0.5-fold when IL-6 was applied with different pathway inhibitors. 2-7 fold when Worthmannin inhibitor is applied as PI3K inhibitor, when PD169 inhibitor was applied as a p38 MAP kinase inhibitor, 2-10 fold increase was determined when SP600125 inhibitor was applied as JNK inhibitor, 2-7 fold increase when NFKB inhibitor was applied, 20-30 fold increase was determined in the mRNA level of ADAMTS-8 gene.