Dihidropirimidinazın bazı leguminosae türlerinden izolasyonu ve karakterizasyonu

Abstract

Bu yüksek lisans tez çalışmasında Pisum sativum L. (Bezelye) ve Albizzia julibrissin Durazz.(Gülibrişim)'den dihidropirimidinaz (EC 3.5.2.2) izole ve karakterize edilmiştir. Bu amaçla belirtilen iki bitki için bir saflaştırma prosedürü tespit edilip uygulanmıştır. Öncelikle bu iki bitki laboratuvar ortamında yetiştirilerek enzimin ekstraksiyonu gerçekleştirilmiştir. Daha sonra da enzim ısıtma, amonyum sülfatla çöktürme ve jel filtrasyon kromatografisi ile kısmen saflaştırılmıştır. Elde edilen dihidropirimidinazın optimum sıcaklık dereceleri dihidrourasil (DHU) için 60 °C, dihidrotimin (DHT) için 55 °C5 pH dereceleri her iki substrat için 9.5 tespit edilmiştir. Dihidropirimidinazın stabilitesi hem ham ekstraktta, hem de amonyum sülfatla çöktürme ile elde edilen örneklerde belirlenmiştir. DHU ve DHT için Km değerleri sırasıyla 0.33 mM ve 0.44 mM, Vmox değerleri de 0.23 nkatal/sn/ml ve 2.51 nkatal/sn/ml olarak hesaplanmıştır. Bazı metal iyonlarının bu enzime olan etkileri de araştırılmıştır. DHPazın aktivitesini, AgN03 % 94, HgCl2 % 87, FeS04 % 80 ve CoCl2 % 24 oranında azaltırken, SnCl2 % 18, MnSO4 % 14 oranında artırmıştır.

Dihydropyrimidinase was isolated and characterized from Pisum sativum L. and Albizzia julibrissin Durazz in this present investigation. A purification procedure was determined and applied for this purpose. Firstly, those two plant species were grown at laboratory then enzyme was isolated. Subsequently the enzyme was purified by using heat treatment, precipitation with ammonium sulphate and gel filtration chromatography technics. The optimum temperatures of dihydropyrimidinase were 60 °C and 55 °C for dihydrouracil (DHU) and dihydrothymine (DHT) respectively. Optimum pH value of dihydropyrimidinase for two substrates was determined as 9,5. The stability of dihydropyrimidinase was determined both in crude enzymic extract and in the sample that obtained from ammonium sulphate precipitation. The effect of some metal ions on that enzyme was also examined. Km values of the enzyme for DHU and DHT were 0.33 mM and 0.44 mM respectively. VMax values were calculated as 0.23 nkatal/sn/ml and 2.51 nkatal/sn/ml for DHU and DHT respectively. The activity of dihydropyrimidinase was decreased by AgN03 (94 %), HgCl2 (87 %), FeS04 (80 %) and CoCl2 (24 %) but increased by SnCl2 (18 %) and MnS04 (14 %).