Farklı koyun ırklarından saflaştırılan paraoksonaz enziminin ağır metallerle inhibisyonu

Abstract

Bu çalışmada, detoksifikasyon ve antioksidan aktivitesi ile metabolizmada önemli fizyolojik fonksiyona sahip paraoksonaz (PON) enzimini merinos ve kıvırcık koyunu kan serumlarından saflaştırmak için Sepharose-4B-L-tirozin-1-naftilamin bileşiği hidrofobik etkileşim kromatografisi jeli kullanılmıştır. Söz konusu jel, CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B'ye uzantı kolu olarak L-tirozin bağlandıktan sonra ligand olarak hidrofobik bir molekül olan 1-naftilaminin L-tirozine kenetlenmesi sonucu sentezlenmiştir. Sentezlenen hidrofobik etkileşim jeli ile uygulanan hidrofobik etkileşim kromatografisi ve amonyum sülfat çöktürmesi yöntemleri kullanılarak merinos ve kıvırcık koyunu kan serumlarından PON enzimi saflaştırılmıştır. Saflaştırılan PON enzimi SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak yaklaşık 43 kDa molekül ağırlığına sahip tek bant elde edilmiştir. Merinos ve kıvırcık PON enziminin paraokson substratına karşı KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk yöntemi ile merinos PON enzimi için 0,482 mM ve 41,348 U/mLdak ve kıvırcık PON enzimi için 0,153 mM ve 70,289 U/mLdak olarak bulunmuştur. Bu çalışmada Mn2+, Hg2+, Co2+, Cd2+, Ni2+ ve Cu2+ ağır metallerinin merinos ve kıvırcık koyunlarının kan serumundan saflaştırılan PON enzimi üzerindeki in vitro etkisi belirlenmiştir. Söz konusu ağır metaller içinde Cu'ın hem merinos hem de kıvırcık PON enzimi için en güçlü inhibitör olduğu saptanmıştır.

In this study, the important physiological function in metabolism with detoxification and antioxidant activity of paraoxonase (PON) enzyme, to purify from merino and kivircik sheep's blood serums, Sepharose-4B-L-tyrosine-1-naphthylamine compound was used a gel, hydrophobic interaction chromatography. The gel was synthesized with Sepharose-4B-L-tyrosine and 1-napthylamine as hydrophobic ligand. Sepharose-4B was activated with CNBr and than L-tyrosine was added as extension arm. Merino and kivircik serum paraoxonase was purified with ammonium sulfate precipitation and with synthesized hydrophobic interaction chromatography. On SDS-polyacyrilamide gel electrophoresis, purified human serum paraoxonase yielded a single band of 43 kDa on SDS-PAGE. The KM ve Vmax values were determined by the method of Lineweaver-Burk plots, using paraoxon as substrate. The KM ve Vmax were 0,482 mM and 41,348 U/mLdak for merino PON enzyme, 0,153 mM and 70,289 U/mLdak for kivircik PON respectively. In this study, the effect of Mn2+, Hg2+, Co2+, Cd2+, Ni2+ and Cu2+ heavy metals on purified merino and kivircik serum PON in vitro was determined. The heavy metals in both merino and kivircik PON enzyme was found to be the most powerful inhibitory.