Koyun serum paraoksonaz enziminin bazı pestisitlere karşı ilgisinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, detoksifikasyon ve antioksidan aktivitesi ile metabolizmada önemli fizyolojik fonksiyona sahip paraoksonaz (PON) enzimi Merinos ve Kıvırcık koyunu kan serumlarından saflaştırılmıştır. Saflaştırmada Sepharose-4B-L-tirozin-1-naftilamin hidrofobik etkileşim kromotografisi jeli kullanılmıştır. Sepharose-4B, CNBr ile aktifleştirilmiş ve uzantı kolu olarak L-tirozin bağlanmıştır. Uzantı koluna 1-naftilaminin kenetlenerek hidrofobik etkileşim kromotografisi jeli sentezlenmiştir. Merinos ve Kıvırcık koyunu kan serumlarından PON enzimi önce amonyum sülfat ile çöktürülmüştür. Daha sonra sentezlenen Sepharose-4B-L-tirozin-1-naftilamin hidrofobik etkileşim kromotografisi jeli ile saflaştırılmıştır. Enzim saflığı SDS-PAGE ile kontrol edilmiştir. Her iki koyun türü için de 66 kDa molekül ağırlığına sahip tek bant elde edilmiştir. Merinos ve kıvırcık PON enziminin paraokson substratına karşı KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk yöntemi ile belirlenmiştir. Merinos PON enzimi için KM ve Vmax değerleri 0,482 mM ve 41,348 U/mLdak, Kıvırcık PON enzimi için KM ve Vmax değerleri 0,153 mM ve 70,289 U/mLdak olarak bulunmuştur. Bu çalışmada, Decis 2,5 EC™, Fosforin M™, Confidor SC 350™, Gibber 20 SI™ bileşiklerinin Merinos ve Kıvırcık koyunlarının kan serumundan saflaştırılan PON enzimi üzerindeki in vitro etkisi belirlenmiştir. Kıvırcık koyunundan elde edilen PON enziminin aktivitesi üzerinde % 50 inhibisyona sebep olan inhibitör konsantrasyonları sırasıyla Decis 2,5 EC™ için 1.0019 mM, Fosforin M™ için 21.3591 mM, Confidor SC 350™ için 18.4029 mM ve Gibber 20 SI™ için 2.7217 mM olarak bulunmuştur. Merinos koyunundan elde edilen PON enziminin aktivitesi üzerinde % 50 inhibisyona sebep olan inhibitör konsantrasyonları sırasıyla Decis 2,5 EC™ için 1.6552mM, Fosforin M™ için 21.9900 mM, Confidor SC 350™ için 57.5900 mM ve Gibber 20 SI™ için 1.9800 mM olarak bulunmuştur.

In this study, paraoxonase enzyme which has an important physiological function in metabolism were purfied from Merinos and Kıvırcık blood serum. For purification Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine hydrophobic intraction chromatography gel was used. Sepharose-4B was activated by CNBr and L-Tyrosine was used as a spacer arm. The Hydrophobic intraction chromatography gel was synthesized by coupling 1-Napthylamine to the spacer arm. PON enzyme from Kıvırcık and Merinos blood serum was firstly precipitated by ammonium sulfate. Later, it was purified by Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine hydrophobic intraction chromatography gel. Enzyme purity was checked by SDS-PAGE. Molecular weight of the enzyme for both sheep species was found to be approximately 66 kDa with a single band. Km and Vmax values of Merinos and Kıvırcık PON enzyme against paraoxon substrate were determined by Lineweaver-Burk method. Km and Vmax values were 0,482 mM and 41,348 U/mLmin for Merinos PON enzyme, 0,153 mM and 70,289 U/mLmin for Kıvırcık PON. In this study, the in vitro effects of Decis 2,5 EC™, Fosforin M™, Confidor SC 350™, Gibber 20 SI™ compounds were determined on purified PON enzyme of Merinos and Kıvırcık sheep species. Inhibitor concentrations caused 50% inhibition on PON enzyme obtained from Kıvırcık sheep were 1.0019 mM for Decis 2,5 EC™, 21.3591 mM for Fosforin M™, 18.4029 mM for Confidor SC 350™, 2.7217 mM for Gibber 20 SI?. Inhibitor concentrations caused 50% inhibition on PON enzyme obtained from Merinos sheep were 1.6552 mM for Decis 2,5 EC™, 21.9900 mM for Fosforin M™, 57.5900 mM for Confidor SC 350™, 1.9800 mM for Gibber 20 SI™.