Paraoksonaz 1 enziminin yeni bir hidrofobik jel ile saflaştırılması

Abstract

Fizyolojik substratı henüz belirlenmemiş olan Paraoksonaz 1 (PON1); arilesteraz, paraoksonaz ve laktonaz aktivitesine sahip bir ester hidrolazdır. Paraoksonaz 1 (PON1) enzimi detoksifikasyon ve antioksidan aktivitesi ile metabolizmada önemli bir fizyolojik fonksiyona sahiptir. Bu çalışmada, insan paraoksonaz 1 (PON1) enzimi için amonyum sülfat çöktürmesi ve Sepharose-4B-L-tirozin-1-aminoantresen hidrofobik etkileşim kromatografisinden oluşan iki aşamalı yeni bir saflaştırma stratejisi geliştirilmiştir. Hidrofobik etkileşim kromatografisi jeli, CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B'ye uzantı kolu olarak L-tirozin bağlandıktan sonra ligand olarak hidrofobik bir molekül olan 1-Aminoantresenin L-tirozine kenetlenmesi sonucu sentezlenmiştir. Sentezlenen hidrofobik etkileşim jeli ile hidrofobik etkileşim kromatografisi ve amonyum sülfat çöktürmesi yöntemleri kullanılarak insan serumundan paraoksonaz 1 (PON1) enzimi saflaştırılmıştır. Saflaştırılan insan serum paraoksonazı SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak yaklaşık 43 kDa molekül ağırlığına sahip tek bant elde edilmiştir. 674 kat saflaştırılan PON1 enzimi %16,17 verimle elde edildi.

Physiological substrates that are not to be determined, yet, of paraoxonase (PON1), is an ester hydrolase, which has arylesterase, paraoxonase and lactonase activity. Paraoxonase (PON1) enzyme has an important physiological function in the metabolism with detoxification and antioxidant activity. In this study, a new purification strategy for human PON1 enzyme was developed using two-step procedures, namely ammonium sulphate precipitation and sepharose-4B-L-tyrosine-1-aminoantrecene hydrophobic interaction chromatography. The gel was synthesized with Sepharose-4B-L-tyrosine and 1-aminoantrecene as hydrophobic ligand. Sepharose-4B was activated with CNBr and then L-tyrosine was added as extension arm. Human serum paraoxonase was purified with ammonium sulfate precipitation and synthesized hydrophobic interaction chromatography. Purified human serum paraoxonase yielded a single band of 43 kDa on SDS-PAGE. PON1 enzyme was obtained with a yield 16,17% and the prufication was 674 fold.