TSPAN8 geninin transkripsiyonel regülasyonunun aydınlatılması

Abstract

Tetraspanin ailesi birçok fizyolojik ve patolojik süreçte yer almaktadır. Tetraspaninler hücresel seviyede hücrelerin adezyonu, migrasyonu, proliferasyonu ve füzyonunu düzenlemektedir. Tetraspanin ailesinin bir üyesi olan TSPAN8 geninin tümör metastazı ile ilişkili olduğu bilinmektedir. TSPAN8 geninin fazla miktardaki ekspresyonunun sindirim sistemi kanserlerinde kötü prognoz ile ilişkili olduğu belirlenmiştir. TSPAN8 geninin transkripsiyonel regülasyonunun belirlenmesi, genin tümör biyolojisi üzerindeki etkilerinin mekanizmasının aydınlatılması için oldukça önemlidir Bu çalışmada, insan TSPAN8 geninin transkripsiyonel regülasyonunun belirlenmesi amacıyla, dört farklı uzunlukta (-1540 / + 41, -1048 / +41, -398 /+41, -145/+41) promotor parçası lusiferaz haberci vektörlerine klonlanmış ve dizi analizi ile kontrol edilmiştir. Bazal promotor aktivitesi MIA-PaCa-2 pankreas kanseri hücrelerinde geçici transfeksiyon analizleri ile ölçülmüş ve [-1540 /+ 41] bç uzunluğundaki promotor parçası en yüksek bazal aktivite göstermiştir. İnterlökin 6 (IL-6) sitokinin MIA-PaCa-2 hücrelerinde normal oksijen koşulları ve hipoksik koşullarda 24 ve 48 saatte mRNA ve protein seviyesinde TSPAN8 ekspresyonunda değişikliğe sebep olduğu belirlenmiştir. TSPAN8 promotor parçalarının transfekte edildiği hücrelere IL-6 uygulamasının da transkripsiyonel aktivitede azalmaya neden olduğu belirlenmiştir.

Tetraspanins take part in a variety of physiological and pathological processes. At the cellular level, tetraspanins modulate cell adhesion, migration, proliferation and fusion. It is known that TSPAN8, a member of tetraspanin superfamily, associate with tumor metastasis. The expression of TSPAN8 is linked to poor prognosis of digestive system cancers. Therefore, it is so important to elucidiate the regulation of TSPAN8 gene that it is so crucial in tumor biology. In this study, four truncated promoter constract (-1540/+ 41, -1048/+41, -398/+41, -145/+41) of TSPAN8 gene was cloned into reporter vector including luciferase enzyme to determine transcriptional regülation of TSPAN8 gene the promoter region of and checked by sequence analyzer. Transient transfection has performed in MIA-PaCa-2 pancreas cancer cell lines using promotor constructs and analyzed. Basal promoter activities are measurued by transient transfection analysis and [-1540 /+ 41] bp promotor region showed highest basal activity. Interlökin 6 (IL-6) cytokine is applied to MIA-PaCa-2 cells under the normoxia and hipoxia conditions. It is determined that TSPAN8 expression in mRNA and protein levels changed at 24 and 48 hours after stimulation. Also, application of IL-6 cytokine to TSPAN8 transfected cells resulted in decrease of transcriptional activity in both normoxic and hypoxic conditions.