Bazı flavonoidlerin sığır karaciğer glutatyon S-transferaz enzimi üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

Antiviral, antibakteriyel, antiinflamatuar, vazodilatör, antioksidan ve antiradikal aktivitelerinden dolayı flavonoid tüketimi oldukça popüler hale gelmiştir. Ancak bu bileşiklerin yan etkilerinin önemli bir sorun olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada, başta detoksifikasyon olmak üzere birçok biyolojik fonksiyona sahip glutatyon S-transferaz (GST) enzimi üzerinde bazı flavonoidlerin etkisi araştırılmıştır. GST enzimi, Holştayn karaciğerinden hidrofobik etkileşim kromatografisi (HEK) ile saflaştırılmıştır. Bu amaçla Sepharose 4B-L-tirozin-9- naftilamin kimyasal yapısına sahip jel kullanılmıştır. Enzimin saflığı sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS- PAGE) ile kontrol edilmiştir. Holştayn GST (hGST) enziminin Km ve Vmax değerleri, 1-kloro-2,4- dinitrobenzen (CDNB) ve glutatyon (GSH) substratları kullanılarak Linewear- Burk yöntemine göre tespit edilmiştir. Bu değerler GSH için sırasıyla 1,11 mM, 3,06 EÜ/ mL; CDNB için 1,34 mM, 1,89 EÜ/ mL’ dir. Araştırmamızda çalışılan flavonoidlerin, hGST üzerinde etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla % 50 inhibisyona sebep olan inhibitör konsantrasyonları (IC50) bulunmuştur. Bulunan sonuçlara göre en güçlü inhibitör 2,1 mM IC50 değeri ile 4’-(4-nitrofeniltiyoürenil)-6-hidroksi-apigenidin olarak saptanmıştır.

Due to its antiviral, antibacterial, antiinflammatory, vasodilator, antioxidant and antiradical activities, flavonoid consumption has become very popular. However, side effects of these compounds are known to be a major problem. In this study, the effect of some flavonoids on the glutathione S-transferase (GST) enzyme with many biological functions, mainly detoxification, was investigated. The GST enzyme was purified by hydrophobic interaction chromatography (HEK) from Holstein liver. For this purpose, gel with Sepharose 4B-L-tyrosine-9-naphthylamine chemical structure was used. The enzyme purity was controlled by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The Km and Vmax values of Holstein GST (hGST) enzyme were determined by Linewear-Burk method using 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) and glutathione (GSH) substrates. These values were 1.11 mM, 3.06 EU / mL for GSH; 1.34 mM for CDNB and 1.89 EU / mL for CDNB. The effects of flavonoids studied in our study on hGST were investigated. For this purpose, inhibitor concentrations (IC50) causing 50% inhibition were found. According to the results, the strongest inhibitor was identified as 4’-(4-nitrofeniltiyoürenil)-6-hidroksi-apigenidin with an IC50 of 2.1 mM.