İnsan ADAMTS-1 geninin transkripsiyonel regülasyonu

Abstract

ADAMTS'ler (A Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs) hem memelilerde hem de omurgasızlarda bulunan bir ekstrasellular, proteaz ailesidir. ADAMTS'ler ilk olarak, ADAMTS-1 ile Kuno ve arkadaşları tarafından 1997 yılında tanımlanmıştır, daha sonra ise ailenin diğer 18 üyesi tanımlanmıştır. Hem anti-anjiyogenetik etkisi hem de agrekanaz aktivitesi bulunan ADAMTS-1 geninin ekspresyonu birçok patofizyolojik durumda değişmektedir. Ancak, literatür incelendiğinde ADAMTS-1 geninin transkripsiyonel regülasyonu ile ilgili bilginin sınırlı olduğu görülmektedir. Çalışmamızda ADAMTS-1´in Hep3B hücre hattında transkripsiyonel regülasyonu aydınlatılmaya çalışılmıştır. İlk olarak Hep3B hücrelerinde, CoCl2 ile indüklenen hipoksik modeli oluşturulmuş ve hipoksik durumun ADAMTS-1 mRNA'sının seviyesini arttırdığı belirlenmiştir. Yedi farklı promotor parçası transfekte edilerek ADAMTS-1 transkripsiyonel aktivitesi belirlenmiştir. Ektopik olarak SP1, C/EBPα ve USF transkrispiyon faktörleri hücrelere verilerek (i) Transkripsiyonel aktiviteye etkileri (ii) ADAMTS-1 mRNA seviyesi (iii) ADAMTS-1 protein seviyesine etkileri incelenmiştir. Bu etki hem normal oksijen koşullarında hemde hipoksik koşullarda, 24, 48 ve 72 saatlerde araştırılmıştır. Normal oksijen koşullarında, SP1 ve USF genel anlamda promotor parçalarında transkripsiyonel aktiviteyi azaltırken, bu etki mRNA ve protein düzeyinde de sürmüştür. C/EBPα da ise transkripsiyonel, mRNA ve protein düzeyinde istatistiki olarak anlamlı olacak bir etki görülmemiştir.

ADAMTS (A Disintegrin and Metalloprotease with Thrombospondin Motifs) is a novel family of extracellular proteases found in both mammals and invertebrates. ADAMTS-1, identified by Kuno at all in 1997, is the first member of ADAMTS family. Subsequently, the other 18 members of the family have been isolated. It has been shown that the expression of ADAMTS-1 that has both anti-angiogenetic and aggrecanese activity was disregulated in many pathophysiologic circumstances. However, there is limited information available on transcriptional regulation of ADAMTS-1 gene in the literature. In this study, the transcriptional regulation of ADAMTS-1 is elucidated in HEP3B cells. Firstly, CoCl2-induced hypoxic model was performed in Hep3B cells and the hypoxic condition led to the induced ADAMTS-1 mRNA expression. Transcriptional activity was determined by transfecting seven different ADAMTS-1 promotor constructs into the Hep3B cells. The effect of ectopic expression of SP1, C/EBPα and USF on ADAMTS-1 gene expression was analysed in (i) transcription activity of promotor constructs (ii) ADAMTS-1 mRNA level (iii) ADAMTS-1 protein level. The study was performed in both hypoxic and normoxic conditions with different time points namely, 24h, 48h and 72h. In normoxic conditions, SP1 and USF transcription factors resulted in the decrease in ADAMTS-1 transcriptional activity consistent with mRNA and protein level. On the other hand, C/EBPα transcription factor didn?t show any statistically significant effect on ADAMTS-1 gene expression.