Malatya kayısısı (Prunus Armeniaca L.) çekirdeğinden Beta-Glukozidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmanın amacı bitkilerde önemli rolü olan ß-Glukozidaz enzimini, Malatya kayısısı meyva ve çekirdeğinden saflaştırmaktır. Enzim aktivitesi meyva ve çekiredekte iki dönem olarak araştırılmıştır. Her iki dönemde de enzim aktivitesinin çekirdekte daha yüksek olduğu bulunmuştur. Bu yüzden sonraki çalışmalarda enzim, kayısı çekirdeğinden saflaştırılarak karakterize edilmiştir. Ekstraksiyon aşamasını takiben amonyum sülfat çöktürmesi yapılmış ardından hidrofobik etkileşim kromatoğrafisi ile enzim saflaştırılmıştır. Enzim % 14 verimle 11.1 kat saflaştırılmış ve SDS-PAGE’de molekül ağırlığı yaklaşık 60 kDa olarak görüntülenmiştir. Saflaştırılan enzimin optimum sıcaklık değeri 55°C ve optimum pH değeri 5.0 olarak tespit edilmiştir. Para-Nitrofenil ß–D-glukopiranosid (p-NPGlu), orto-nitrofenil ß–D-glukopiranosid (o-NPGlu), para-nitrofenil ß–D-galaktopiranosid (p-NPGal) ve orto-nitrofenil ß–D-galaktopiranosid (o-NPGal) bazı yapay substratların enzime olan ilgisi araştırılmıştır. p-NPGlu için KM değeri 2.48 Mm, Vmax değeri ise 58.14 EU bulunmuş, enzimin en yüksek afiniteyi bu substrata karşı gösterdiği tespit edilmiştir. Saflaştırılan kayısı çekirdeği ß-Glukozidazına, glukoz ve δ-Glukonolaktonun inhibitör etkileri araştırılmıştır. Glukozun enzimi güçlü inhibe etmediği görülmüş ve dolayısıyla IC50 değeri hesaplanmamıştır. δ-Glukonolaktonun IC50 değeri ise 0.83 mM olarak bulunmuştur.

The aim of this study is to purify ß-Glucosidase, which has important role in plants, from both fruit and seed parts of Malatya apricot separately. Enzyme activity was investigated in two periods as the seed and fruit. Enzyme activity in seed extract was determined quite higher than the activity from fruit extract in both periods. Therefore, the enzyme has been isolated from seeds of apricot and subsequently purified during the entire experiments. Following the extraction, the enzyme was precipitated with ammonium sulfate and purified by using hydrophobic interaction chromatography. The enzyme was purified 11.1- fold with 14 % yield and enzyme protein was visualized and determined moleculer weight about 60 kDa on SDS-PAGE gel. Optimum temperature and pH of the purified enzyme were determined as 55°C and 5.0 respectively. Some of the artificial subsrates of the enzyme para-nitrophenyl ß-D-glucopyranoside (p-NPGlu), para-nitrophenyl ß-D-galactopyranoside (p-NPGal), orto-nitrophenyl ß-D-glucopyranoside (o-NPGlu) and orto-nitrophenyl ß-D-galactopyranoside (o-NPGal) have been investigated in the interest of. Kinetic values of the enzyme, which are expressed as KM and Vmax were determined against p-NPGlu as 2.48 mM and 58.14 EU, respectively. The inhibitory effects of glucose and δ-Gluconolactone were investigated on purified apricot seed ß-Glucosidase. Glucose was observed that due to the not strong inhibition and IC50 value was not calculated. IC50 value of δ-Gluconolactone was determined as 0.83 mM.