Muz polifenol oksidaz enziminin immobilizasyonu ve bazı özelliklerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada; Sepharose 4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak polifenol oksidaz (PPO) enzimi muz (Musa cavendishii) meyvesinden saflaştırılmıştır. Saflaştırılan PPO enziminin ω-aminoheksil agaroz jeli üzerine gluteraldehit ile immobilizasyonu gerçekleştirilmiştir. Elde edilen immobilize enzimin optimum pH ve sıcaklık, Km ve Vmax sabitleri, termal kararlılık, depo kararlılığı gibi bazı biyokimyasal özellikleri belirlendi ve serbest enzimle karşılaştırıldı. İmmobilize ve serbest enzimin Km değerleri sırasıyla 12 mM, 13.8 mM ile Vmax değerleri sırasıyla 84724.22 U/mLdak, 37887 U/mLdak olarak elde edilmiştir. PPO’nun klasik inhibitörlerinden olan p-aminobenzoik asit, kafeik asit, kojik asit, L-askorbik asit ve gallik asitin serbest ve immobilize enzim üzerine inhibisyon etkileri çalışıldı. p-aminobenzoik asit ve kafeik asit immobilize enzim için daha kuvvetli bir inhibitör iken gallik asit ise serbest enzim için daha kuvvetli bir inhibitördür. L-askorbik asit ve kojik asit inhibitörleri ise her iki enzim içinde benzer etki göstermiştir. Yapılan inhibisyon çalışmasının tamamına bakıldığında; L-askorbik asit serbest ve immobilize enzim için en kuvvetli inhibitör olarak belirlenmiştir.

In this study, polyphenol oxidase enzyme (PPO) were purifed from banana (Musa cavendishii) by using affinity gel comprised of Sepharose 4B-L-tyrosine-p-amino benzoic acid. The immobilization of the purfied PPO enzyme with glutaraldehyde was performed on ω-aminohexyl agarose gel. Some of properties of obtained immobilized enzyme such as optimum pH and temperature, kinetic parameters (Km and Vmax), thermal stability, storage stability were determined and compared to its free enzyme. Km values of immobilized and its free enzyme were obtained 12 mM, 13.8 mM, respectively. Vmax values of immobilized and its free enzyme were obtained 84724.22 U/mLmin, 37887 U/mLmin, respectively. Inhibitory effects were studied on the immobilized enzyme and its free enzyme of p-aminobenzoic acid, caffeic acid, kojic acid, L-askorbic acid and gallic acid which are the classic inhibitors of PPO. While p-aminobenzoic acid and caffeic acid being a more powerful inhibitor for immobilized enzyme, gallic acid is a more powerful inhibitor for free enzyme. As for the inhibitors which are L-ascorbic acid and kojic acid found to have the same effect for both free immobilized enzyme. According to the complete inhibition study, L-ascorbic acid has been determined as the most powerful inhibitör for both free and immobilized enzyme.